大蛇丸试炼是非对称竞技方法，每局对局会匹配6名玩家。开局先从体系给出的随机忍者池选择自己要用的忍者，之后会随机抽选一名玩家成为红色的实验体BOSS。BOSS不仅血量和伤害数值比普通玩家高很多，还自带全程霸体效果。剩下的5名玩家则作为普通学员阵营参和对局，普通学员如果被BOSS击杀，就会转化为白色的小型实验体。转而加入BOSS阵营，攻击还没被转化的其他学员。

胜负判定逻辑很简单，如果普通学员阵营能成功击败红色实验体BOSS。或者对局时刻结束时，还有至少一名普通学员存活，就算学员方获胜。要是全部普通学员都被转化成了实验体，那就是实验体阵营获胜。对局结束后会根据局内的伤害输出量、存活时长、击杀数量换算成对应积分，积分可以兑换各种日常养成材料。不过每天能拿到的积分有固定上限，达到上限后再参和对局也不会额外获取奖励。

如果被分配到普通学员阵营，选忍者的时候优先挑有超距离输出能力的忍者。最好带位移技能、技能前后摇短，比如奈良鹿丸、干柿鬼鲛、赤砂之蝎、夕日红这类。这类忍者不需要贴脸就能打出伤害，遇到BOSS突袭也能靠位移快速拉开距离，容错率比短手近战忍者高很多。

普通学员不要开局就主动往BOSS脸上冲，先观察BOSS的位置。利用地图中间的帷幕、墙角这类点位躲藏，帷幕有视野遮挡的效果，躲在帷幕一侧的时候另一侧的敌人看差点。输出的时候尽量等BOSS放完技能的空窗期，绕到他的背后蹭伤害放奥义，打完立刻拉开距离。要是遇到已经被转化的白色小实验体，用超距离技能消耗就行。尽量不要同时被BOSS和多个小实验体夹击，不然很难躲避全部的攻击。

要是成为BOSS，可以躲在帷幕后面偷袭，等遇到学员扎堆的时候再释放奥义。奥义的伤害范围很大，命中率会高很多。前期优先追着落单的普通学员打，快速把对方转化成小实验体，扩大自己的阵营优势。如果被转化为小实验体，也可以利用视野盲区偷袭。先靠技能和普攻消耗对方血量，等对方血量较低的时候再用奥义割菜就行。